2025/6/24(화)

sectioning

금일 historogy 과정 중 하나인 sectioning 과정을 참관하였다. gel embedding 과정을 거친 후 굳어 진 쥐의 뇌를 blade를 통해 더 정밀하게 자른다. 추가적으로 뇌를 훼손시키지 않게 조심한다.

sectioning 단계를 설명하자면,

1. 계수대에 위치한 냉각수를 벨브를 열어준다.

2. rotating microtome의 전원을 킨디.

3. start를 눌러주고 온도를 settingg한다.

4. 쥐의 뇌를 냉각판에 고정시킨다. (이때 뇌가 필자가 바라봤을 때 정면을 보게 위치시킨다.)

5. blade를 꽂고 시계 방향으로 돌려 sectiong을 진행한다.

rotating microtome의 실제 모습이다. 화면 조작을 통해 온도 조작이 가능하며, 필자가 참관했을 때 온도는 -55였다.

위 사진처럼 어는점이 높은 oct compound를 냉각판에 올려 쥐의 뇌를 고정 시킬 수 있게 만들어 준다. 좁은 구멍과 넓은 구멍의 용액 통이 존재하는데, 먼저 넒은 구멍의 용액통으로 용액을 넓게 펴준다. 그 후 쥐의 뇌를 고정시키고 좁은 구멍의 용액통을 가지고 더욱 견고하게 고정시켜준다.

어는점이 필자의 생각보다 훨씬 높은 것 같았다. 생각보다 빠르게 굳었다.

sectioning을 진행하는 도중 찍은 사진이다. 기계를 한번 돌릴 때마다 40마이크로씩 sectioning 된다. sectioning된 쥐의 뇌를 붓으로 조심히 떠서 PVB가 담긴 glass에 담가준다. 이때 실험자가 측정에 필요한 여기서 실험자가 얻어야 하는 뇌의 위치를 정확하게 파악해야 한다. 만약 BLA를 얻어야 한다면, BLA가 없는 초반 부분은 6번정도 sectioning후 채집하고, 실험자가 원하는 조직이 존재하는 부분은 4번정도 sectioning후 채집한다.

여기서 주의해야 할 점은 채집해야 할 glass가 2개(DAPI,THIO)라면 4번 sectioning후 채집하는 것이 아닌 2번 sectioning 후 2개를 채집해야 된다는 것이다. ex 4번 sectioning 후 측정할 것이다. - 1,2 sectioning 후 폐기 , 3,4, sectioning 후 붓으로 조심히 떠서 glass에 옮겨준다.

마지막으로 실험 과정 중 나온 폐액은 함부로 버려서는 안된다. 금일 시험 중 사용한 PFA또한 함부로 버려서는 안되기 때문에 유기계폐액 통에 넣어 폐기처리 해준다. 넣기 전 몇mL를 넣는지 주기한다. 주기 내용은 날짜, 폐수 주성분, mL,배출자이다.

추가적으로 명일 DAPI를 진행하기 위해서 sectioning된 쥐의 뇌(4개)를 모두 mounting을 진행했다. 약 4시부터 진행하여 8시 반에 마무리 되었다. mounting과정과 sectioning과정을 진행하며 쥐의 뇌 구조에 대해 자세히 알 수 있었다. 특히 해마를 통해 왼쪽 오른쪽을 구별할 수 있었는데 오른쪽 해마가 왼쪽 해마보다 더 긴 특징을 가지고 있어 해마를 보고 쉽게 구별 할 수 있었다. 명일 진행할 DAPI과정을 통해 쥐의 뇌 구조의 명칭과 역할에 대해 더 자세히 알아보도록 하겠다.